Obsah fóra DAMyko
Domov Amatérských Mykologů
Technika: Kvalita mikroskopů a pozorovací techniky.
Jdi na stránku 1, 2, 3, 4  Další
odeslat nové téma   Odpovědět na téma   Obsah fora -> Mikron - Fórum o mikroskopii nejen hub
Zobrazit předchozí téma :: Zobrazit následující téma  
Autor Zpráva
Bob
Site Admin


Založen: 04. 11. 2005
Příspěvky: 9053
Bydliště: Kladno-Mimoň

PříspěvekZaslal: st 06. prosince 2006 9:38
  Předmět: Technika: Kvalita mikroskopů a pozorovací techniky.
Odpovědět s citátem Url adresa tohoto příspěvku

Zdarec ... včera jsem dlouze dumal o tom jak porovnat mikroskopy mezi sebou (každý prodejce řekne, přijď se kouknout Smile), a taky jak se liší jednotlivé pozorovací techniky ... překvapivě jsem nenarazil na obrázky, která by to na stejném preparátu porovnávali. Tak mne napadlo ... Mat60 kdysi nabízel, že by tu a tam něco někomu klidně namikroskopoval ... tož Mate SmileSmileSmile ... co takhle vzít něco, co může mít každý kdykoli a kdekoli (aby mohl alůespoň trochu porovnávat) ... navrhuji plíseň z Hermelínu (udej značku a model Smile) ... myslím, že to pak můžeš i vložit do atlasu. No a ukaž nám, jak vypadají obrázky z pořádného stroje (popiš alespoň některé jeho parametry). Zajímal by mne především normální obraz, obraz v temném poli, fázový kontrast, DIC, a třeba i Nomarského a podobně. Člověk by si pak snad alespoň udělal trochu představu o tom co by měl vidět, kdyby to bylo super duper. Toto samosebou platí i pro ostatní, kdo chtějí s tímto srovnáním pomoci. Bude zajímavé mít vedle sebe obrázky ze stroje za 5 tisíc a 500 tisíc. Asi bude též potřeba uvádět, jak a čím byl obrázek vyfocen. Preparáty nebarvit i barvit, ale porovnat. Jde mi vlastně o to, abych šel do krámu, koupil hermelín a pak vyrazil k prodejci, máznul kus na sklo, zákápl vodou, přihodil druhé sklo a kouknul, vyfotil a porovnal. Myslím, že nějčastěji jsem viděl obrázky mikroznaků ve zvetšení 400x a 1000x ... tož to by asi mohl být nějaký "standard".

Naposledy upravil Bob dne čt 31. května 2007 12:02, celkově upraveno 1 krát
Návrat nahoru
Zobrazit informace o autorovi Odeslat soukromou zprávu Odeslat e-mail Zobrazit autorovy WWW stránky
mat60
Čestný člen


Založen: 02. 12. 2005
Příspěvky: 2571
Bydliště: Paskov

PříspěvekZaslal: st 06. prosince 2006 10:21 Odpovědět s citátem Url adresa tohoto příspěvku

No to je fakt zajímavý nápad. Klidně něco nafotím, ať vidíme jaké jsou rozdíly v optice Smile. Ale napadá mě jedna věc a to, že hermelínová plíseň to budou samá vlákna a žádné výtrusy. Bude strašně moc záležet na tom jak připravit preparát, aby vypadal pěkně. Asi bude lepší začít s něčím geomericky líp definovatelným Laughing. Teď mě napadají jenom kvasinky, tj. pekařské kvasnice Laughing. Jenom nevím jak je šetrně ubezdušit, aby se v preparátu zbytečně moc nepohybovaly a nevyráběly CO2.

Ještě je třeba říct, že kvasinky budou test velmi, velmi obtížný - jsou bílé a skoro průhledné a to je pro většinu mikr. to nejhorší, co je může potkat.
Návrat nahoru
Zobrazit informace o autorovi Odeslat soukromou zprávu Odeslat e-mail Zobrazit autorovy WWW stránky
Bob
Site Admin


Založen: 04. 11. 2005
Příspěvky: 9053
Bydliště: Kladno-Mimoň

PříspěvekZaslal: st 06. prosince 2006 10:31 Odpovědět s citátem Url adresa tohoto příspěvku

Hele teď mi blesklo hlavou, že nejsme v době kamenné ... vždyť hlívy jsou skoro v každém supermarketu i zelenině !!! OK, v malém městě nikoli, ale tam zase obvykle nejsou ani ti prodejci mikroskopů ... což tedy třeba hlíva !!!!!!!! Smile
Návrat nahoru
Zobrazit informace o autorovi Odeslat soukromou zprávu Odeslat e-mail Zobrazit autorovy WWW stránky
mat60
Čestný člen


Založen: 02. 12. 2005
Příspěvky: 2571
Bydliště: Paskov

PříspěvekZaslal: st 06. prosince 2006 10:59 Odpovědět s citátem Url adresa tohoto příspěvku

06. prosince 06, 9:31 Bob napsal:
Hele teď mi blesklo hlavou, že nejsme v době kamenné ... vždyť hlívy jsou skoro v každém supermarketu i zelenině !!! OK, v malém městě nikoli, ale tam zase obvykle nejsou ani ti prodejci mikroskopů ... což tedy třeba hlíva !!!!!!!! Smile


Pokud ty hlívy v obchodě nebudou moc staré ani moc mladé a ani oschlé, tak jo. U starých hrozí vypadání, u mladých nedozrání Laughing.

Velmi dobrý by byl taky hnojník třpytivý. Roste hojně a ještě i teď.


Naposledy upravil mat60 dne st 06. prosince 2006 11:42, celkově upraveno 1 krát
Návrat nahoru
Zobrazit informace o autorovi Odeslat soukromou zprávu Odeslat e-mail Zobrazit autorovy WWW stránky
Bob
Site Admin


Založen: 04. 11. 2005
Příspěvky: 9053
Bydliště: Kladno-Mimoň

PříspěvekZaslal: st 06. prosince 2006 11:39 Odpovědět s citátem Url adresa tohoto příspěvku

Hnojník není tak snadno dostupný jako hlíva v krámě.
Návrat nahoru
Zobrazit informace o autorovi Odeslat soukromou zprávu Odeslat e-mail Zobrazit autorovy WWW stránky
mat60
Čestný člen


Založen: 02. 12. 2005
Příspěvky: 2571
Bydliště: Paskov

PříspěvekZaslal: út 12. prosince 2006 9:51 Odpovědět s citátem Url adresa tohoto příspěvku

Když si Bobe přeješ obrázky výtrusů hlívy ústřičné, tak je máš mít Laughing. Je to sice docela problematické focení a obrázky nejsou a nebudou nikdy úplně super, ale jako test mikroskopů (a současně taky digitálů pro snímání) je to docela použitelné, ale extrémně náročné.

Výtrusy jsem získal z přestárlých plodnic, rostoucích u sousedky na špalcích z vlašského ořechu. Výtrusy byly získány přirozeným napadáním na podložní skla a preparáty jsou evidentně kontaminované nějakými bakteriemi.

Výtrusy hlívy ústřičné jsou zcela bezbarvé, průhledné, oválné s velmi nevýraznou a tenkou buněčnou stěnou a obsahují uvnitř spoustu organel s vysokým indexem lomu. Obraz jak v mikroskopu, tak i na fotkách je velmi nekontrastní a je problém na co vlastně ostřit. Cílem není zvýraznit organely, ale hlavně dokumentovat celkový tvar výtrusů a jejich rozměry. Výtrusy hlívy bude proto rozhodně výhodné nějakým způsobem barvit.

Normálně se ostří buď na vnější povrch buněčné stěny nebo tak do 1/3 až 1/2 tloušťky výtrusů. U výtrusů hlívy je největšího kontrastu dosahováno až v zadní polovině tloušťky, kde organely z důvody vysokého indexu lomu tmavnou.

Napřed uvádím různě ostřené obrázky výtrusů při maximálním zvětšení na optickém mikroskopu bez barvení (objektiv PlanApochromat 100x, olej. im.). Obrázky nebyly nijak upravovány, pouze byla zmenšena velikost na 800x600, bez doostřování.



   89.64 kB    
A toto je ostřené na maximální kontrast, tj. do zadní poloviny výtrusů.
hliva-1d.jpg
   hliva-1d.jpg

   86.24 kB    
Toto je ostřené zhruba na střed.
hliva-1c.jpg
   hliva-1c.jpg

   74.39 kB    
Toto je ostřené přibližně na povrch buněčných stěn.
hliva-1.jpg
   hliva-1.jpg
Návrat nahoru
Zobrazit informace o autorovi Odeslat soukromou zprávu Odeslat e-mail Zobrazit autorovy WWW stránky
mat60
Čestný člen


Založen: 02. 12. 2005
Příspěvky: 2571
Bydliště: Paskov

PříspěvekZaslal: út 12. prosince 2006 10:08 Odpovědět s citátem Url adresa tohoto příspěvku

Teď přidávám obrázek s použitím Nomarského diferenční interferenční kontrastu (DIC). Bylo použito max. zvětšení s obj. PlanApochtomat 100x., olej. im. a Nomarského hranol na max. fázový kontrast. Preparáty při Nomarského DIC jsou zbarveny z důvodu interference a fázového posunu polarizovaného světla. Zbarvení závisí na pozici Nomarského hranolu. Cílem DIC je zvýraznit objekty s různým indexem světla, především povrchy buněk ve styku s mediem. Současně s tím objekty dostávají reliéf a vykazují takový pseudoplastický dojem.


   75.56 kB    
Nomarského kontrast.
hliva-1g.jpg
   hliva-1g.jpg
Návrat nahoru
Zobrazit informace o autorovi Odeslat soukromou zprávu Odeslat e-mail Zobrazit autorovy WWW stránky
Bob
Site Admin


Založen: 04. 11. 2005
Příspěvky: 9053
Bydliště: Kladno-Mimoň

PříspěvekZaslal: út 12. prosince 2006 10:13 Odpovědět s citátem Url adresa tohoto příspěvku

No super! ... víš, Mate, co jěště nějaký ostří lupenu či tak něco, co lze udělat okamžitě na místě ... zvětšení třeba jen 40x objektivem.
Návrat nahoru
Zobrazit informace o autorovi Odeslat soukromou zprávu Odeslat e-mail Zobrazit autorovy WWW stránky
mat60
Čestný člen


Založen: 02. 12. 2005
Příspěvky: 2571
Bydliště: Paskov

PříspěvekZaslal: út 12. prosince 2006 10:51 Odpovědět s citátem Url adresa tohoto příspěvku

12. prosince 06, 9:13 Bob napsal:
No super! ... víš, Mate, co jěště nějaký ostří lupenu či tak něco, co lze udělat okamžitě na místě ... zvětšení třeba jen 40x objektivem.


Co, kde a jak na místě? To jako myslíš, že vezmu mikroskop na záda a vyrazím za hlívou Laughing Laughing Laughing. No, pokud ty hlívy budou ještě alespoň trochu použitelné, tak můžu prubnout pomikroskopovat něco na lupenech.


Napřed ale nějaké hlívové výtrusy z konfokálu. To je totiž nejjednodušší mikroskopování, alespoň co se týče přípravy vzorků Laughing.

Výtrusy hlívy ú. v konfokálním mikroskopu jsou takové slimákovité. Příliš nedrží tvar, rozlévají se trochu a tvarují se podle podložky. Dokonce se spolu slepují a hranice mezi slepenými výtrusy není pak patrná.



   125.97 kB    
Toto jsou výtrusy na sobě na patra. U spodních nejsou moc znatelná ohraničení.
hlivax3.jpg
   hlivax3.jpg

   157.25 kB    
Takto se slepují.
hlivax2.jpg
   hlivax2.jpg

   111.16 kB    
Výtrusy hlívy ústřičné v konfokálním rastrovacím laserovém mikroskopu Olympus LEXT OLS 3000.
hlivax1.jpg
   hlivax1.jpg


Naposledy upravil mat60 dne út 12. prosince 2006 10:54, celkově upraveno 1 krát
Návrat nahoru
Zobrazit informace o autorovi Odeslat soukromou zprávu Odeslat e-mail Zobrazit autorovy WWW stránky
mat60
Čestný člen


Založen: 02. 12. 2005
Příspěvky: 2571
Bydliště: Paskov

PříspěvekZaslal: út 12. prosince 2006 10:53 Odpovědět s citátem Url adresa tohoto příspěvku

Ještě jeden obr. z konfokálu a jeho prostorová rekonstrukce.


   169.52 kB    
Na tomto obr. je asi vidět nejvíc detailů.
hlivax4.jpg
   hlivax4.jpg

   79.66 kB    
3D rekonstrukce obrazu výtrusů.
hlivax4c.jpg
   hlivax4c.jpg
Návrat nahoru
Zobrazit informace o autorovi Odeslat soukromou zprávu Odeslat e-mail Zobrazit autorovy WWW stránky
Bob
Site Admin


Založen: 04. 11. 2005
Příspěvky: 9053
Bydliště: Kladno-Mimoň

PříspěvekZaslal: út 12. prosince 2006 11:10 Odpovědět s citátem Url adresa tohoto příspěvku

Smile Časem bude hlíva nepromikroskopovanější houbou DAMyka Smile ... Jinak, myslel jsem vzít houbu k mikroskopu a nikoli mikroskop k houbě SmileSmileSmile ... Myslel jsem, připravit preparát u prodejce a kouknout a nafotit, vystavit tady a porovnat a rozhodnout Smile Těžko tam asi čekat na vypadání výtrusů ... já vím, nechají se doma napadat den předem ... ale ... Smile
Návrat nahoru
Zobrazit informace o autorovi Odeslat soukromou zprávu Odeslat e-mail Zobrazit autorovy WWW stránky
mat60
Čestný člen


Založen: 02. 12. 2005
Příspěvky: 2571
Bydliště: Paskov

PříspěvekZaslal: út 12. prosince 2006 11:40 Odpovědět s citátem Url adresa tohoto příspěvku

12. prosince 06, 10:10 Bob napsal:
Smile Časem bude hlíva nepromikroskopovanější houbou DAMyka Smile ... Jinak, myslel jsem vzít houbu k mikroskopu a nikoli mikroskop k houbě SmileSmileSmile ... Myslel jsem, připravit preparát u prodejce a kouknout a nafotit, vystavit tady a porovnat a rozhodnout Smile Těžko tam asi čekat na vypadání výtrusů ... já vím, nechají se doma napadat den předem ... ale ... Smile


Připravovat preparáty v Kauflandu, Makru, Tesku nebo nějakém jiném kšeftě Laughing Laughing Laughing, to půjde jenom velmi těžko. Je třeba vypreparovat jeden lupen a z něho část uříznout (max. 1-2 mm), vhodně otočit, dát do kapky vody, přikrýt krycím sklíčkem a rozumně stlačit. Takových preparátů bývá třeba udělat několik aby byl výběr. Nejlepší k mikroskopování jsou okraje toho kousku lupenu, na ploše nebývá obyčejně vidět nic. A příprava preparátů se nejlíp dělá pod binokulárem.

Je to docela piplačka a navíc ty preparáty moc nevydrží. Já nechávám ty výtrusy napadat na sklo hlavně proto, že to nepřikryté vydrží neomezeně a počká to až na ně mám čas.



12. prosince 06, 10:10 Bob napsal:

Jinak, myslel jsem vzít houbu k mikroskopu a nikoli mikroskop k houbě SmileSmileSmile ...


Viděl jsem i něco jako terénní mikroskop. Bylo to na zavěšení na krk a byl to ale spíše binokulár vhodný tak pro broučkaře. Laughing
Návrat nahoru
Zobrazit informace o autorovi Odeslat soukromou zprávu Odeslat e-mail Zobrazit autorovy WWW stránky
mat60
Čestný člen


Založen: 02. 12. 2005
Příspěvky: 2571
Bydliště: Paskov

PříspěvekZaslal: út 12. prosince 2006 14:45
  Předmět: První pokus o barvení
Odpovědět s citátem Url adresa tohoto příspěvku

Toto je první pokus o barvení výtrusů hlívy. Obr. byly obarveny metylénovou modří (0.25% roztok). Barvení funguje poměrně dobře - výtrusy jsou oproti pozadí trochu obarvené, organely se ale barví daleko intenzivněji. Nejlepší obr. se dosáhně, pokud nastaví WB u kamery na okolí bez výtrusů. Nevýhodou bylo, že výtrusy zřejmě získaly při adsorbci barviva povrchový náboj, neboť vykazovaly Brownův pohyb. Objektiv byl PlanApochromatl 100x, olej. im..


   114.49 kB    
Barvení metylénovou modří, okolí bylo zkompenzováno na neutrální šedou pomocí nastavení WB u kamery
hliva-MB5.jpg
   hliva-MB5.jpg

   141.89 kB    
Barvení metylénovou modří
hliva-MB4.jpg
   hliva-MB4.jpg

   74.88 kB    
Barvení metylénovou modří
hliva-MB3.jpg
   hliva-MB3.jpg


Naposledy upravil mat60 dne út 12. prosince 2006 14:55, celkově upraveno 1 krát
Návrat nahoru
Zobrazit informace o autorovi Odeslat soukromou zprávu Odeslat e-mail Zobrazit autorovy WWW stránky
mat60
Čestný člen


Založen: 02. 12. 2005
Příspěvky: 2571
Bydliště: Paskov

PříspěvekZaslal: út 12. prosince 2006 14:51
  Předmět: Druhý pokus o barvení
Odpovědět s citátem Url adresa tohoto příspěvku

K barvení byl použit nepufrovaný roztok fuchsinu (0.2 %). Barvení fungovalo velmi dobře, lépe než u metylénové modři - výtrusy jsou sytě probarvené, pozadí je skoro bezbarvé. Nebylo potřeba kompenzovat barvu pozadí. Objektiv byl PlanApochromatl 100x, olej. im..


   62.86 kB    
Barvení výtrusů hlívy ústřičné fuchsinem.
hliva-F7.jpg
   hliva-F7.jpg

   71.89 kB    
Barvení výtrusů hlívy ústřičné fuchsinem.
hliva-F9.jpg
   hliva-F9.jpg

   50.21 kB    
Barvení výtrusů hlívy ústřičné fuchsinem.
hliva-F8.jpg
   hliva-F8.jpg
Návrat nahoru
Zobrazit informace o autorovi Odeslat soukromou zprávu Odeslat e-mail Zobrazit autorovy WWW stránky
Bob
Site Admin


Založen: 04. 11. 2005
Příspěvky: 9053
Bydliště: Kladno-Mimoň

PříspěvekZaslal: čt 18. ledna 2007 18:00 Odpovědět s citátem Url adresa tohoto příspěvku

Tak jsem se byl kouknout do jednoho Olympuse. Hlívu měli včera v makru poslední a značně ohmatanou. Pak ji prohmatalo asi 50 lidí na přednášce, a teprve pak putovala do lednice a ráno do Prahy a odpoledne pod mikroskop.

Snažil jsem se udělat preparát z ostří lupenu, ale dost se nám nedařilo. Až na třetí pokus jsme viděli něco, co mi připomíná bazidie. Překvapivě pro mne pouze s jedním "nosníkem" pro výtrus. Po výtrusech ani vidu ani vidu. Opravte mne jestli se mýlím. Kousek byl odříznut kapesním nožíkem, šoupnut do kapky vody z vodovodu a přikryt sklíčkem, které bylo lehce přitlačeno.

Na obrázku je produkt následující optické soustavy:

Mikroskop CX41 + PLNC (= planachromat C) 40x Ph.C. + Trinokular FN=20 50% oko 50% foťák + nástavec s čočkou 2,5x + kompakt CP 350 (CCC 1/1,8", 8 MPix (ale asi nefotil na celý čip neboť pořízený obrázek je menší)). Foceno do JPG (nastavení nevím a navíc je to obtížně porovnatelné). Obrázky jsou výřezy 1:1 uložené v JPG 100% kvality. Vlevo je bright field (tedy normálně) a vpravo je stejný objektiv ale s Ph.C. (= phase contrast = fázový kontrast) a také samosebou bright field. Celý obrázek zachycoval plochu asi 269 x 202 mikrometrů.

Jak je vidět, těch optických členů je asi přeci jenom moc a aberace je značná.

Zítra přinesu totéž, ale za zrcadlovky, tj. vyřadí se nástavec 2,5x a objektiv - na displeji to foťáku to vypadalo výrazně lépe.



   213.88 kB    
JPGMax.jpg
   JPGMax.jpg
Návrat nahoru
Zobrazit informace o autorovi Odeslat soukromou zprávu Odeslat e-mail Zobrazit autorovy WWW stránky
Zobrazit příspěvky z předchozích:   
odeslat nové téma   Odpovědět na téma   Obsah fora -> Mikron - Fórum o mikroskopii nejen hub Časy uváděny v GMT + 1 hodina
Jdi na stránku 1, 2, 3, 4  Další
Strana 1 z 4

 
Přejdi na:  
Můžete odesílat nové téma do tohoto fóra
Můžete odpovídat na témata v tomto fóru
Nemůžete upravovat své příspěvky v tomto fóru
Nemůžete mazat své příspěvky v tomto fóru
Nemůžete hlasovat v tomto fóru
Nemůžeš připojovat soubory k příspěvkům
Můžeš stahovat a prohlížet přiložené soubory