Preparát - Výtrusy: Jak připravujete vzorek výtrusů?

[Bob]

Jak připravujete vzorek výtrusů?

Standartně se výtrusy nechají vytrousit tak, že se klobouk položí hymeniem na papír (nejlépe takový ne kterém se pak bude dát snadno určit barva výtrusného prachu - chromotaxie???) a překlopí něčím za zabrání proudění vzduchu a ponechá se přes noc. Pokud chcete zachovat nohu, vyřízněte do apíru díru a třeň prostrčte ... pak už to nějak vyřešíte ... ok, mám výtrusy ... co dál?

[mat60]

Když to samé uděláš na podložní sklíčko, tak máš luxusní preparát výtrusů pro mikroskopování. Na to sklíčku se i lépe hodnotí barva výtrusného prachu - když je světlý, tak na tmavé podložce atd.

[Bob]

A tohle rovnou strčíš pod objektiv? Nebo to ještě překryješ krycím?

[mat60]

[Bob]

četl jsem to březový!

[gekko]

Jo to je asi nejlepší (ve smyslu nejsprávnější) způsob. Protože jsem trochu (dost ) líný tak strčím pod sklíčko mírně roztlačený úlomek lupenu a mám v jednom preparátu elementy na lupenech (cystidy apod.) a spory. Pak je třeba ale měřit spory co volně plavou v mediu protože ty co drží na lupenech nemusí být úplně vyvinuté což zkresluje měření...(a proto je nejlepší mikroskopovat z vypadaného výtrusného prachu protože tam je těch zralých nejvíc)

[Bob]

Je to logický, ale nenapadlo mne to. Je potřeba měřit ty vypadané a nikoli ty co ještě sedí na bazidiích !!!

[mat60]

[Bob]

Nad tím jsem onehdá taký rozmýšlel ... asi je třeba s tím počítat a měřit si jen ty s velmi podobný tvarem. ... teď napadalo ... u výtrusů se udává Q parametr, což je tuším poměr délky versus šířky. Když vezmy nějaký šišoidní výtrus v prostoru, tak jeho orientace bude dóst ovlivňovat ten tvar, který uvidím, alias to Q, které naměřím. A dále mne pak ještě napadlo ... jak jsi tu minule ukazoval ty "vydechnutý" výtrusy ... to musí také nutně hodně ovlivňovat to Q ... alias, není právě u těch hub co mají vydechnuté výtrusy to Q s podstatně větším rozptylem/vůlí/limity než u těch výtrusů, které jsou nevyfouklé? či tak něco?

[mat60]

Jasně, že to všechno ovlivńuje rozměry a způsobuje velký rozptyl. Výtrusy to jsou obyčejně takové trojosé elipsoidy. Správně by se měl v prostoru najít nejdelší rozměr - délka, pak druhý nejdelší - kolmá k prvnímu - šířka a nakonec ten třetí nejdelší. Když jsou ty výtrusy položené na sklíčku tak není naprosto žádná jistota jak jsou uložené a jestli ta délka je opravdu nejdelší. Dost často jsou výtrusy taky napasované jeden pod druhého nebo se o sebe opírají. Mikrometrické okulárové měřítko má taky omezenou přesnost a chybu způsobuje taky omezená hloubka ostrosti.

Na konfokálu se dají délky měřit o dost přesněji. Je tam možné provést prostorovou rekonstrukci výtrusu. Problém je ale v deformaci výtrusů na suchu. Všechny udávané rozměry výtrusů jsou měřené ve vodě. Proto délky na konfokálu u výtrusů neměřím.

[Bob]

A je to tu, moje první foto výtrusů je zde:


Jak mat60 poznamenal jinde, je to asi "pohybově neostré" tj., je to rozmazané-neostré díky nějakému pohybu. Zdroje jsou asi dva:

1. Hýbe se preparát nebo aparát ... fotím dálkovou spouští s předsklopením zrcadla. Při expozici se to trochu dost zachvěje, ale to je prý poexpoziční záležitost = návrat zrcadla a nikoli pohyb závěrky či tak něco. Takže tohle vynechme.

2. Zdrojem je pohyb výtrusů. To bude asi ono. Takže jak udělat preparát, aby v něm všechno neplavalo sem a tam? Vypozoroval jsem, že voda z preparátu mizí velmi rychle a tak by asi pomohlo, kdyby se okraje preparátu zamastili glycerinem (to jsem někde onehdá četl), aby nedocházelo k odpaření vody. Možná by to chtělo používat zcela jiné médium. Třeba rovnou vodu s glycerinem (taky jsem někde četl) a ještě do toho přidat nějaký surfaktant jako třeba dodecylsulfonát sodný (taky jsem někde četl, 1% přídavek), kvůli smáčivosti ... zejména u shluků vláken z pýchavek a prášivek je téměř nemožné zbavit se bublinek uvízlých v jejich sítích. Mat tady doporučoval březový šampón, ale do toho se mi moc nechce - přijde mi to takové "nevědecké" a mám trochu obavu jak takové šampónové složky reagují s houbami a případně i činidly. Chtěl bych si namíchat nějaký univerzální koktejl.

Máte nějaké rady, nápady či ověřené triky?

[Lupo]

Neříká se tomu Brownův pohyb? ... o něčem takovém jsme se učili ve fyzice, nebo v chemii ... navrhuji to zmrazit

[Jirka Kohl]

a což tak "Bobův pohyb".... navrhuju nezmrazovat ! - zatim...

[mat60]

Brownův ani Bobův pohyb to u výtrusů skoro nikdy není . Ty jsou na to příliš velké. Výtrusy se pohybují hlavně z důvodu nehomogenního napětí v krycím sklíčku, tlaku objektivu na krycí sklíčko, přenosů povrchového napětí, z důvodu odpařování kapaliny na okrajích prep. atd. Někdy, hlavně když jsou výtrusy dobře zmáčivé a když se používá im. objektiv je to s pohybem výtrusů jen pro hodně silné povahy . Dost často se stává, že než si člověk nachystá mikroskop a vyladí clony, čas atd., tak se výtrusy rozhodnou, seberou se a z ničeho nic zmizí. Nebo plavou ve více vrstvách nad sebou .

Brownův pohyb, tj. takové chaotické záškuby a trhavé pohyby je možné běžně pozorovat na baktériích a např. na micelách imerzního oleje. To když se imerzák podteče pod krycí sklo a dostane do styku s vodou.

[mat60]