Technika: Fotografujeme přes mikroskop

[mat60]

[Bob]

Potřeboval bych osvětlit ještě dalších několik pojmů:
1. Abbe kondenzor N.A. 1.25 s aperturní irisovou clonou
Někdy je uváděn pouze Abbeho kond., někdy nejn konden., a někdy jen irisová clona. Je to potřeba všechno?
2. Koehlerovo osvětlení
Je to důležité?

[mat60]

[Bob]

takže je to obojí nezbytné?

[mat60]

[Bob]

Mate, k tématice nadpisu tohoto fóra ... Psal jsi mi, že mám na těch fotkách fialový "lem" kolem objektů http://www.damyko.info/ForumA/viewtopic.php?p=17593#17593,

a že to je asi přemírou světla, tj. moc silným prosvícením ... to máš jistě pravdu (doufám, protože by to znamenalo, že fotky kazím já a nikoli technika - takže je to snad řešitelné ), ono je to vlastně logické, když vezmu, že je to analogické jako focení v protisvětle

No, máš nějaké doporučení jak moc to má být asi nasvícené?

Mám i problém v tom, abych nastavil správný expoziční čas či ten správný režim, abych neměl fotky pře-pod exponované. Jaké s tím máte zkušenosti? či nápady co vyzkoušet?

[mat60]

[Bob]

jojo, jedná se o fotky těch prášivek - doplnil jsem URL fóra a linknul tu fotku.

[mat60]

Musím spechat. Zítra ráno ti to rozepíšu. Nebo, pokud nevydržíš, tak si najdi na netu jak se nastavuje Kohlerovo zobrazení - Kohler ilumination.

[Bob]

Já nechvátám! Tak taky nechvátej! Nikdo by nikdy neměl chvátat!

[mat60]

Když nechvátáme, tak pěkně pomaličku .

Nejprve si ujasníme co na mikroskopu je co a jestli to tam vlastně máš. Pak přijde na pořad seštelování podle Kohlera.

Postupně po dráze světla. Naspodu, nad lampou je polní clona. Ta se nechává otevřená nebo jen mírně přivřená. Pak nasleduje Abbeho kondenzor. Kondenzorem se dá pohybovat a to šroubem obyčejně na levé straně. Výška kondenzoru je dost důležitá a ovlivňuje kvalitu obr. Na čele kondenzoru v cca jeho jedné třetině je aperturní clona. Ta taky ovlivňuje obrázek. Praví se, že má být u pozorování ve světlém poli nastavená tak na 80% hodnoty numerické apertury objektivu. Jenže apert. clona nemívá moc často stupnici v hodnotách apertury, ale jenom takové nepopsané čárky. Nahoře kondenzoru je skoro vždy přídavná, odklopitelná čočka. Ta se rozhodně nechává zařazená, pouze u obj. 4x a někdy i u 10x je lépe ji odklopit a to pokud zorné pole není osvětlené celé. Vyklápí se takovou páčkou skoro pod deskou stolku na pravé straně. Pak je vzorek a objektivy. U obj. není obyčejně co nastavovat. Výjimkou jsou celkem špičkové objektivy pro tmavé i světlé pole s proměnlivou aperturou. Ty mají ve spodní části prstenec, kterým se nastavuje aperturní clona uvnitř objektivu. Pro světlé pole se dává co největší apertura, tj. clona se otevírá na doraz, u tmavého pole se spíše uzavírá. To je asi skoro všechno, čím se dá šroubovat nebo šoupat. Bertrandovu čočku, Nikoly, Nomarského hranoly atd. nemáš. Objektivy se centrují jenom u mikroskopů s otočným stolkem.

Centruje se taky lampa, ale když je to nové, tak asi budeme věřit, že je v pořádku.

Centrací fázového kontrastu nemám nacvičenou, popis centrace ale někde mám. Je to, pokud vím takový otočný prstenec, který je zamontovaný v kondenzoru. Pro světlé pole každopádně používej volnou pozici.


Tak, že si zjisti kde se hýbe kondenzorem, kde je páčka pro přídavnou čočku a kde se uzavírá polní a aperturní clona. Až to budeš vědět, tak budu pokračovat s nastavením Kohlerova zobrazení.

[Bob]

hmmm to jsou věci Tak já si to vytisknu a detailně prohledám mikroskop

[mat60]

A ať na to nezapomenu. Teď přijde to oné Kohlerovo osvětlení, resp. nastavení osvětlení v mikroskopu podle Kohlera, tj. Kohler illumination.

1. Dá se nějaký preparát a objektiv 20x.
2. Úplně se uzavře polní clona na světle i aperturní clona na kondenzoru.
3. Kondenzorem se pohybuje nahoru nebo dolů, do polohy až jsou obrysy clony zaostřené. Bývá to spíše nahoře. Pokud není obraz clony ve středu zorného pole, tak se zcentruje kondenzor pomocí centračních šroubů tak aby světlý kroužek byl ve středu.
4. Otevře se polní clona tak aby se jenom lehce vrcholy dotýkala okrajů zorného pole nebo aby právě zmizela. Pokud je asymetricky, tak se přecentruje kondenzor jak ve uvedeno výše.
5. Když má aperturní clona stupnici, tak se nastaví na stejnou hodnotu NA jakou má objektiv nebo lépe na 75% této hodnoty. Když na cloně není stupnice num. ap., tak se vyjme se okulár a pomalu se uzavírá aperturní clona při pohledu do trubky až je cca 1/3 tmavá z zůstavají 2/3 plochy světlé.

Není to nic složitého, jenom platí, že při každé změně objektivu by se měla upravit apetrurní clona.

Tolik teorie. V praxi jsou možné a někdy i přínosné určité odchylky. Jedná se především o apert. clonu. S uzavíráním ap. clony více než je hodnota NA obj. sice trošku roste hloubka ostrosti, ale zvyšuje se při tom i podíl šumu a artefaktů (světlé Beckeho linky atd.). Nastavení ap. clony se dělá dost často podle obrazu. U pozice kondenzoru je to skoro stejné, jenom podíl artefaktů bývá ještě větší. Když je ale obojí mimo optimum, tak bývá obraz dost špatný.

[Bob]

Tak jo, ještě jedno kolečko jsem tam našel Jezdí to nahoru dolu Ale odklápění čočky nemám (zdá se) ... budu s tím teď trochu laborovat a snad k něčemu dospěji. Díky moc za pomoc!

[Neotronic]

Zravim vsetkych, http://www.heliconsoft.com/heliconfocus.html je program uzitocny na vrstvenie viacerych fotiek do jednej ostrej.