Preparát: Čím barvit preparáty?

[Bob]

Čím to barvíte, aby byl lepší "kontrast" a bylo něco vidět?

[mat60]

Já moc nebarvím - používám fázový kontrast. Ono barvení má jinak smysl jenom když dochází ke skutečnému nabarvení preparátu a ne jenom k zbarvení okolí.

[Bob]

Tož jsem brouzdal webem a narzil jsem na pár zajímavých věcí ... asi nejčastěji se používá lactophenol cotton blue ... na Mycology online se dá najít i mnoho jiných věcí viz.: http://www.mycology.adelaide.edu.au/Laboratory_Methods/Microscopy_Techniques_and_Stains/

[gekko]

Většinou používám skoro na všechno Cotton blue v laktofenolu, tuším že se nějak váže na b. stěny hyf (ale není zas tak nutné). Na holubinky a ryzce Melzerovo reagens, na vřeckaté houby KI nebo taky Melzera.

[Bob]

Moc se mi líbí obrázky, kterých pomocí tohoto činidla dosáhl Mat při mikroskopování prsnatky Rosellinia corticium.

Zejména pak následující fotografie:


A tak jsem zabrouzdal webem a něco o něm zde napíši.

Borec co to vymyslel se jmenoval Jean Guillaume Auguste Lugol a žil od 18.8.1786 do 16.9.1851.

Činidlo se připravuje tak, že se ve 100 ml vody (H2O) rozpustí 1,5 g jodidu draselného (KI) a následně 0,5 g jódu (I2). Našel jsem i jiné poměry: 6 g KI ve 100 ml H2O a 3 g I2. Někdy se uvádí, že vznike roztok trijodidu draselného (KI3), ale roztok je mnohem složitější a vznikají spíše draselné soli různých polyjodidů, no to patří odborníkům z anorganické chemie. Laikovi by asi mělo stačit, že se jedná o roztok jódu ve vodném roztoku jodidu draselného, kde se jód dobře rozpouští, na rozdíl od jeho malé rozpustnosti ve vodě. A jako roztok jódu se Lugolovo činidlo i chová (že je to složitější jsem už zmínil). O jódu je známo, že barví škrobové látky do modra a tak se není čemu divit, že Lugolovo činidlo, kterému se v angličtině říká Lugolův jód (Lugol's Iodine), dělá totéž, a používá se tedy k důkazu různých škrobů. Při jejich přítomnosti dochází ke změně barvy na modrofialovou až černou. Dále se činidlo používá při Gramově barvení, ale třeba i k dezinfekci

No a jaké koncentrace používá Mat?

[mat60]

. Tak tento obr. je nabarvený dost špatně. Neměl jsem tehdy namíchané nic s jódem, tak jsem vzal jódovou tinkturu (jodisol) z lékarničky a trochu ji naředil vodou. Barvilo to, ale jenom velmi málo. Je tam přece jenom moc lihu a jsou tam jiné komplexy.



Obrázek výše, co se překopíroval Bob je barený 10x ředěným Lugolovým roztokem. Původní návod byl 10g KI + 5g I + 85 ml H2O a bylo to totálně černé a neprůhledné. 10x ředěný je podobný Melzerovi, ale bez chloralu.

Výhoda Melzer. r. je v tom, že je průhlednější, jinak je to podobné.

Rosellinie mají ty špunty na vřeckách asi hodně amyloidní, že to vyšlo tak tmavě nabarvené. Asi by stačil i 100x ředěný Lugol. r. aby obrázky neměly zbytečně hnědý nádech.

[Bob]

Aháááá, tož jsem to zeditoval a do toho Tvého jsem přidal link na obrázek barvení jodovou tinkturou Tož si to nějak zedituj, ať to dává smysl

[mat60]

Vynikající stránka - přehled barvicích bilol. metod s návody

http://stainsfile.info/StainsFile/stain/stainindex.htm

resp. začátek je tady:
http://stainsfile.info/StainsFile/jindex.html

[Bob]

tuším často barvíte kongo červení ... nebo se pletu? Jakým roztokem to děláte? Tj. jaká koncentrace a v čem, a jaký postup barvení používáte?

[Bob]

kterej se používá? neutrální nebo kyselý nebo nějaký pufrovaný? V čem a jak koncentrovaný a jak se aplikuje?

[Bob]

Našel jsem teď na webu tento útržek:
A. Visualization of fungi in tissue preparations
A.1. Treatment with 10% potassium hydroxide
A.2. Positive stain with
A.2.a. Lactophenol cotton blue
A.2.b. Grocott silver stain
A.2.c. Hematoxylin
A.2.d. Eosin
A.3. Negative stain with India ink

co dělají houby při působení 10%ního hydroxydu draselného?

[Tuřín]

No dost často se neděje nic barevného, některým houbám například bobtnají nebo se až rozpouštějí stěny hyf a někdy taky tmavnou, ale většinou se KOH (i slabší stačí 3-5 %) používá jako médium, které projasňuje a taky změkčuje např. některá hustá "pletiva".

[Mirekk]

Houby jsem zatím nezkoušel, v bakteriologii klasické Gramovo barvení - Huckerova modifikace.

[Bob]

V katalgu firmy Fluka (www.sigmaaldrich.com) jsem k barvení hub našel dvě věci za celkem akceptovatelný peníz. Akorát nevím, komu všemu to jsou ochotní prodat.

Lactophenol cotton blue (cat. no. 61335), 100 mL za 495,90 Kč.
Ref.: (a) E.J. Baron, S.M. Finegold Bailey and Scott's Diagnostic Microbiology, (1990) (b) P.R. Murray et al., eds. Manual of Clinical Microbiology Washington DC , (1999).

Lactophenol picric acid (cat. no. 41506), 100 mL za 559,70 Kč.
Picric acid (2,4,6-trinitrophenol) has antibacterial as well as antifungal properties. It stains the fungal spores and hyphae a pale to dark yellow color.
Composition: Phenol 100g, Lactic acid 100 mL, Glycerol 200 mL, Picric acid (saturated aequeous solution) 100 ml

[Lupo]